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天然植物提取物是种天中种指采用一定的溶剂和方法,以植物(植物全部或者某一部分)为原料,然植经过提取、物提分离、取物纯化过程,多环的得到的芳烃方法活性成分(如酚酸、黄酮、测定精油、种天中种生物碱、然植多糖等)…,物提具有含量稳定、取物无污染、多环的无残留、芳烃方法易吸收等优点。测定天然植物提取物种类繁多,种天中种来源广泛,具有抗氧化、抗肿瘤、抗癌等作用。如:天然叶黄素目前主要来源于万寿菊,不仅使用效果较好,且能有效对人们慢性疾病予以防治,尤其是在保护视力以及增强免疫力方面,具有非常显著的应用效果;天然番茄红素目前主要来源于茄科植物西红柿,是一种很强的抗氧化剂,具有较强的消除自由基的能力,还具有防癌、抗癌、预防心脑血管等疾病,美容祛皱等功效,有“植物黄金”之称;葡萄籽中富含原花青素及抗癌物白藜芦醇,其中多酚含量在95%以上;咖啡豆中除含有挥发性物质外,还含有多酚类化合物…,绿原酸作为其中主要的活性成分,具有抗病毒…、抗氧化活性,还可以降低患有自发性高血压鼠和人的血压;姜黄提取物姜黄素类物质具有降血脂、抗凝、抗氧化、利胆、抗癌等作用。因此,随着人民生活水平的提高和健康意识的增强,天然植物提取物的使用范围日益广泛,市场需求量日益增加,目前,天然植物提取物已被广泛应用于食品添加剂、食品保鲜、养殖业、农药杀虫剂、医药等领域。
多环芳烃(PAHs)是广泛存在于环境中的一种持久性有机污染物,具有很强的致畸、致突变、致癌性,由于性质稳定、难于降解,PAHs在空气、水体、土壤中呈不断积累的趋势,并主要通过根部吸收和植物叶片吸收,进入植物体内。在植物提取加工过程中,植物体内多环芳烃随有机溶剂迁移至天然植物提取物中,严重影响天然植物提取物行业的健康发展。我国强制性食品安全标准GB 2762—2017《食品安全国家标准食品中污染物限量》中单纯以苯并[α]芘含量为评价指标,而欧盟委员会835/2011号文件规定了食品中PAHs污染的另一个评价指标为PAH4苯并[α]蒽(BaA),苯并[α]荧蒽(BbF),苯并[α]芘(BαP)的总含量,相较于欧盟以PAH4的总含量作为评价指标而言,我国单纯以BαP的含量作为评价指标得出的结果较为片面。因此,研究能够快速同时测定PAH4总含量的方法具有重要意义。
目前,关于多环芳烃的检测方法主要包括气相色谱法、气相色谱一质谱联用法、气相色谱一三重四级杆串联质谱法和高效液相色谱法等,检测对象主要是环境、空气、土壤、水体、植物油等,尚未见关于天然植物提取物中多环芳烃检测方法的文献报道,由于天然植物提取物基质复杂,有关多环芳烃检测的标准方法及文献方法不能直接应用,如何准确测定天然植物提取物中多环芳烃,是亟需解决的问题。本文采用高效液相色谱法检测5种天然植物提取物中4种多环芳烃,方法对天然植物提取物适用性强,检测准确性高,对天然植物提取物的质量控制具有十分重要的意义。
一、材料与方法
1、材料与试剂
丙酮(色谱纯,美国SR);甲醇(色谱纯,美国SR);正己烷(色谱纯,美国SR);二氯甲烷(色谱纯,美国SR);乙醇(色谱纯,美国SR);乙腈(色谱纯,美国SR);环己烷(分析纯,天津市永大化学试剂有限公司);乙酸乙酯(分析纯,天津市永大化学试剂有限公司);超纯水(18.2MΩ,实验室纯水机自制);16种多环芳烃标准品混标(200μg/mL,o2si)、多环芳烃固相萃取柱(SPE)(500mg,6mL,上海安谱实验科技股份有限公司)。
2、仪器与设备
Waters E2695高效液相色谱仪,配备2475荧光检测器;济宁天华超声电子仪器有限公司TH一600型超声波清洗器;岛津制作所AUY220型分析天平;大龙兴创实验仪器(北京)有限公司Mx—S型漩涡混合器;天津泰斯特仪器有限公司DK一98一IIA型电热恒温水浴锅;长沙湘仪离心机仪器有限公司H一2050R型高速冷冻离心机;北京莱伯泰科仪器有限公司GPC800一Vonex型凝胶渗透色谱仪;上海申生科技有限公司R213B型旋转蒸发仪。
3、色谱条件
色谱柱:Agilent Eclipse PAH C18(4.6×250mm,5μm);柱温:40℃;检测波长:淈:激发波长270nm,发射波长385m;苯并(b)荧蒽、苯并(a)蒽、苯并(a)芘:激发波长288nm,发射波长430nm;进样量:100μL;流速:1.5mL/min;运行时间:40min;流动相A:水;流动相B:乙腈。
4、前处理方法
(1)万寿菊提取物
精确称取0.19万寿菊提取物样品(精确至0.00019)于25mL容量瓶中,用玻璃移液管加入2mL色谱纯丙酮促溶,涡旋使其混合均匀后,加入GPC流动相定容,摇晃混合均匀,超声溶解。使用玻璃注射器,用0.22um滤膜过滤至GPC进样管中,经GPC净化。
收集液使用旋转蒸发仪浓缩至近干,氮气吹干,用2mL 88%乙腈水溶液准确定容,超声溶解,样品液使用一次性注射器过0.22μm滤膜,装小瓶进样检测。
(2)番茄提取物
精确称取0.2~0.39番茄提取物样品(精确至0.00019)于25mL具塞玻璃试管中,用玻璃移液管加入2mL色谱纯二氯甲烷促溶,涡旋使其混合均匀后,加入GPC流动相定容,摇晃混合均匀,在40℃以上的超声波清洗机中超声提取30min。在3500r/min、5℃条件下离心5min。使用玻璃注射器,用0.22μm滤膜过滤至GPC进样管中,经GPC净化。
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相关链接:多环芳烃,丙酮,甲醇,二氯甲烷
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